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Evento: Seminario de Evaluación
Ponente: M. en C. Montserrat Ávila Zozaya
Día: 2022-05-12, a las 14:00:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: Estudio de la función patofisiológica relacionada con cáncer del dominio GAIN de Lphn3 en células HEK293
Resumen:

La latrofilina 3 (Lphn3 o ADGRL3) es una molécula bipartita que pertenece a los receptores acoplados a proteínas G de adhesión (aGPCRs). A través de su región extracelular, la Lphn3 establece interacciones heterofilicas para la formación de interacciones célula–célula, y por medio de su región típica de GPCR es capaz de acoplarse a proteínas G para modular procesos metabólicos o remodelar el citoesqueleto de actina. El gen que codifica para Lphn3 ha sido blanco de mutaciones relacionadas con enfermedades como el cáncer. En un estudio en donde identificaron mutaciones somáticas de muestras de tumores primarios de humano, reportaron que para Lphn3 la mayoría de estas mutaciones estuvieron albergadas en la región codificante para al dominio conservado GAIN, que es el dominio firma de los aGPCRs. El dominio GAIN se encuentra inmediatamente antes del primer pase transmembranal de todos los aGPCRs y en él se lleva a cabo una reacción de autoproteolisis que escinde a Lphn3 en dos regiones pero que al mismo tiempo se mantienen unidas por interacciones no covalentes hasta su transporte a la membrana. Hasta ahora, no está claro cómo las mutaciones identificadas en muestras de tumores de cáncer de pulmón en el dominio GAIN afectan la función de Lphn3. Por lo tanto en este trabajo estudiamos las alteraciones celulares y moleculares de estas variantes relacionadas con cáncer en Lphn3 como una herramienta para revelar funciones desconocidas del dominio GAIN. Lo que descubrimos fue que las mutaciones asociadas a cáncer en el dominio GAIN redujeron la adhesión entre Lphn3 con su ligando endógeno Flrt3, así como también la señalización a través del acople a G13. Además modificaron la remodelación del citoesqueleto de actina y de vimentina y de manera interesante, las propiedades motiles inducidas por Lphn3 silvestre fueron inhibidas cuando se expresó la mutación asociada a cáncer en el dominio GAIN. Estos datos colocan al dominio GAIN de Lphn3 como un regulador importante en la motilidad celular dependiente de Lphn3 ampliando así nuestra comprensión de los eventos celulares y moleculares que vinculan las mutaciones somáticas de Lphn3 con mecanismos relacionados al cáncer

Evento: Seminarios de Presentación de Proyectos de Maestría
Ponente: Theresa Guadalupe Azcárraga Acosta
Día: 2022-05-23, a las 11:30:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: Caracterización biológica y transcriptómica de un modelo metastásico (Samy Met) de carcinoma hepatocelular de ratas inmunocompetentes Fischer 344
Resumen:

El carcinoma hepatocelular es un problema de salud pública que actualmente se encuentra en 3ero y 2do lugar en mortalidad por cáncer en México y el mundo, respectivamente. La alta mortalidad de este tipo de cáncer es debido al diagnóstico tardío y la falta de tratamientos efectivos para etapas avanzadas, donde el 70% de los pacientes mueren a causa de la metástasis. Los modelos actuales de metástasis del carcinoma hepatocelular son mayoritariamente de xenoinjerto en ratones inmunodeficientes. Estos no replican las primeras etapas de la metástasis y no permiten el establecimiento de un microambiente completo y homotípico, limitando la búsqueda de métodos de diagnóstico de metástasis no invasivos, sensibles, eficaces y accesibles. En el laboratorio se desarrolló un nuevo modelo basado en el trasplante de células singénicas de carcinoma hepatocelular metastásico (Samy Met) en ratas inmunocompetentes Fischer 344. Este modelo deberá reproducir fielmente la biología de la enfermedad metastásica, y el objetivo de este proyecto es el estudio biológico y transcriptómico de este modelo y su comparación con un modelo no metastásico (Samy NM), para así poder identificar nuevos posibles biomarcadores de metástasis. Primero se seleccionó la vía ortotópica como la vía de administración que permitió la obtención de metástasis y una clara diferencia entre los dos fenotipos (metastásico y no metastásico). Posteriormente se clonaron ambas líneas celulares Samy Met y Samy NM, y se determinó la capacidad tumorigénica y metastásica de las diferentes clonas obtenidas para seleccionar las clonas que mejor representan el fenotipo buscado. Las clonas seleccionadas están siendo evaluadas en diversas características biológicas y se hará una secuenciación de los mRNAs y lncRNAs. Los datos de secuenciación obtenidos se analizarán con herramientas bioinformáticas con el fin de caracterizar el transcriptoma de cada modelo y encontrar posibles candidatos a biomarcadores de metástasis

Evento: Seminarios de Presentación de Proyectos de Maestría
Ponente: Iván Ulises Flores Alonso
Día: 2022-05-24, a las 11:30:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: Efectos producidos por una variante truncada de la proteína Tau sobre la diferenciación in vitro de células de neuroblastoma SH-SY5Y
Resumen:

En la enfermedad de Alzheimer (EA), la proteína Tau, que normalmente es estabilizadora de los microtúbulos, se agrega anormalmente en el soma de las neuronas debido a que sufre diversas modificaciones postraduccionales. A pesar de que su hiperfosforilación anormal es la principal causa de su función anormal, diversos cortes proteolíticos en la molécula parecen incrementar también sus propiedades patológicas de agregación y toxicidad. Recientemente se descubrió que su truncación en el ácido aspártico 314, causada por Caspasa-2, produce dos fragmentos de esta proteína, denominados Tau1-314 y Tau315-441. Este último fragmento carboxilo de Tau, tiene la capacidad de invadir anormalmente el compartimento nuclear cuando es expresado en células de neuroblastoma. Nuestro laboratorio ha estudiado las consecuencias patológicas de la presencia de este fragmento en el núcleo, encontrando, por estudios de proteómica, que en dichas células se presentó una disminución de la expresión de diversas proteínas esenciales, incluyendo una porción de aquellas que se localizan en este compartimento y que participan en la estabilidad de la estructura y regulación de la expresión genética, así como en la estructuración del citoesqueleto celular. Es interesante mencionar que en la EA, el proceso neurodegenerativo que la caracteriza es compensado por mecanismos de reparación que intentan reconectar a las neuronas que son afectadas en este proceso y se presenta cierta plasticidad neuronal y neurotogénesis, involucrando la expresión y redistribución de proteínas asociadas con la dinámica del citoesqueleto y comunicación sináptica. No siempre se alcanza este fenómeno y se presenta una plasticidad aberrante donde hay degeneración de terminales sinápticas y se presentan neuritas distróficas. Con base en estos antecedentes, hemos hipotetizado que, de aparecer la especie truncada Tau315-441 en la EA y redistribuirse anormalmente al compartimento nuclear, esto podría ser un factor que contribuyera con la alteración de la expresión de proteínas involucradas en los procesos de neuritogénesis y contribuir con el fenómeno de plasticidad aberrante. Para probar esta hipótesis in vitro, en este trabajo se evalúa el efecto que tiene la expresión exógena de Tau315-441 sobre la neuritogénesis y diferenciación de células de neuroblastoma SH-SY5Y, inducidas a diferenciación con ácido retinoico (AR) y del Factor Neurotrófico Derivado del Cerebro (BDNF). Hasta el momento, trabajamos en la estandarización de este modelo celular para poder evaluar los efectos citotóxicos de esta especie truncada de Tau. Después de probar varias condiciones experimentales, hemos encontrado aquellas que nos permiten observar fenotípicamente el desarrollo de procesos neuronales y proyecciones neuríticas, que sugieren el establecimiento de un camino de diferenciación. Es necesario en este momento evaluar bioquímicamente la expresión de marcadores de diferenciación neuronal, para poder contar con este modelo ya estandarizado y evaluar, entonces, los efectos de la Tau truncada sobre la neuritogénesis y diferenciación neuronal

Evento: Seminarios de Presentación de Proyectos de Maestría
Ponente: Montserrat Gutiérrez Soto
Día: 2022-05-24, a las 12:00:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: Identificación del receptor para la proteína Pic de Escherichia coli enteroagregativa en células caliciformes mediante ensayos in silico e in vitro
Resumen:

Escherichia coli enteroagragativa (EAEC) está asociada con diarrea aguda en niños y adultos, diarrea persistente en niños y personas con inmunodeficiencias, y causante de la diarrea del viajero. Dentro de los principales factores de virulencia de EAEC se encuentra la proteína autotransportadora Pic, la cual juega un papel importante durante la colonización del epitelio intestinal del hospedero. Recientemente, se demostró que Pic tiene una actividad dual como secretagogo de mucinas en células caliciformes, independiente de su motivo serín proteasa y como mucinasa que dependiente de su motivo serín proteasa. En ese trabajo también se describió el mecanismo molecular para la secreción rápida de mucinas que está relacionada con la vía PLC/DAG-IP3/Calcio. Sin embargo, hasta ahora se desconoce el receptor de la célula caliciforme que se une a Pic para desencadenar la vía de señalización de PLC. Por lo que consideramos importante determinar cuál es el receptor que desencadena la vía de señalización para la secreción de mucinas en las células caliciformes al estimularlos con la proteasa Pic, así como cuál es la secuencia motivo en Pic que reconoce dicho receptor. Para determinar esto, primero realizaremos acoplamientos moleculares con receptores candidatos que pudieran unirse a Pic y así, también saber en qué motivos de la secuencia de Pic es donde se unen dichos receptores. Posteriormente, deletamos los subdominios de Pic que fueron identificados en la unión con los receptores, para probar dichas mutantes en ensayos de secreción de mucinas en células caliciformes. Adicionalmente, los receptores candidatos serán bloqueados con antagonistas conocidos durante los ensayos de secreción de mucinas inducidos por Pic. Esta estrategia nos permitirá identificar el receptor de la vía de PLC reconocido por Pic, asi como la secuencia motivo de Pic que usa como ligando de dicho receptor, para llevar a cabo su función como secretagogo de mucinas

Evento: Seminarios de Presentación de Proyectos de Maestría
Ponente: Fernando Machado Bistraín
Día: 2022-05-25, a las 11:30:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: EXPRESIÓN DE LAS SUBUNIDADES TAF5, TAF6 Y TAF15 DEL COMPLEJO TFIID, Y TAF5L Y TAF6L DE LOS COMPLEJOS SAGA Y PCAF DURANTE LA PROLIFERACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE LAS CÉLULAS RCE1(5T5)
Resumen:

La red transcripcional que regula la diferenciación del epitelio corneal sólo se conoce de manera parcial. La evidencia sugiere que el factor de transcripción Pax6 dirige el programa de diferenciación; sin embargo, los resultados de diferentes laboratorios indican que la regulación tejido específica es mucho más compleja. Considerando que la expresión de los Factores de Transcripción asociados a TBP (TAFs) varía durante el desarrollo embrionario y durante la diferenciación, es de interés estudiar los cambios en la expresión de los factores TAF5, TAF5L, TAF6, TAF6L y TAF15. Por ello, en este trabajo analizamos la participación de estos factores en la diferenciación de las células RCE1(5T5), que constituyen un modelo in vitro para estudiar la diferenciación del epitelio corneal. Al analizar el transcriptoma de tres etapas de diferenciación encontramos que la expresión de estos TAFs disminuye conforme las células alcanzan la diferenciación terminal. El alineamiento de los mensajeros que codifican estas proteínas, demostró que las secuencias de humano y conejo poseen una identidad por arriba del 90%. Por otra parte, hemos diseñado las sondas para analizar por RT-qPCR los cambios en la expresión de estos mensajeros a lo largo del proceso de diferenciación

Evento: Seminarios de Presentación de Proyectos de Maestría
Ponente: Kevin Antonio Pérez Zaragoza
Día: 2022-05-26, a las 15:00:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: Participación del TLR-4 en la migración e invasión de la línea celular de cáncer de mama MDA-MB-231 estimulada con ácido linoleico
Resumen:

El cáncer de mama es el tumor maligno más frecuente y la principal causa de muerte por cáncer en mujeres en México y en todo el mundo. Estudios epidemiológicos sugieren una fuerte asociación entre altos niveles de ingesta de grasas en la dieta y un mayor riesgo de desarrollar cáncer de mama. El ácido linoleico (AL) es un ácido graso esencial omega-6 y el principal ácido graso en las dietas occidentales. En células de cáncer de mama, el AL induce proliferación, migración e invasión. Los receptores tipo toll (TLRs, por sus siglas en inglés), son sensores de reconocimiento de membrana evolutivamente conservados, propios de la inmunidad innata que reconocen características presentes en la superficie de patógenos o que son liberados por tejido necrótico. Sin embargo, diversos estudios demuestran que TLR-4 se encuentra sobreexpresado en células cancerígenas mamarias, así como que la sobreexpresión de TLR-4 en el tejido tumoral se relacione con la metástasis a ganglios linfáticos. Por lo cual, se sugiere que TLR-4 desempeña un papel importante en la metástasis del cáncer de mama. El objetivo del presente trabajo es estudiar la participación del receptor TLR-4 en los procesos de migración e invasión inducidos por AL en células cancerosas mamarias MDA-MB-231

Evento: Seminarios de Presentación de Proyectos de Maestría
Ponente: Petra Lizbeth Segura Landa
Día: 2022-05-27, a las 10:00:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: Impacto de la autoproteólisis en el perfil de acoplamiento a proteínas G del GPCR de adhesión latrofilina-3
Resumen:

Los receptores de adhesión acoplados a proteínas G (aGPCR) cuentan con un fragmento extracelular largo NTF que contiene varios dominios de adhesión proteína-proteína y un sitio de autoproteólisis dentro de un dominio denominado GAIN que engloba el sitio de corte GPS, el cual genera un fragmento CTF caracterizado por tener 7 dominios transmembranales interconectados por asas extra- e intracelulares. Miembros de aGPCRs denominados Latrofilinas (Lphns) presentan 3 isoformas (Lphn1, Lphn2 y Lphn3), con mayor expresión en el cerebro donde participan en la formación de las sinapsis y adhesión intercelular. La Lphn3 se destaca por ser involucrada en trastornos del neurodesarrollo. Sin embargo, se desconoce la importancia de la autoproteólisis en la vía de acoplamiento a proteínas G que podría activarse en este receptor. En este proyecto, se utilizará el método de mutagenesis dirigida para modificar el sitio de corte GPS y así generar un mutante no escindible de Lphn3. Posteriormente, se analizará el impacto de la mutación sobre el perfil de acoplamiento funcional entre Lphn3 y varias familias de proteínas G utilizando biosensores basados en transferencia de energía de resonancia de bioluminescencia (BRET). Esto nos permitirá comprender el papel biológico de la autoproteólisis en procesos de señalización intracelular mediados por los aGPCRs

Evento: Seminarios de Presentación de Proyectos de Maestría
Ponente: Janik Adriana Tomás Morales
Día: 2022-05-27, a las 13:00:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: El PI3P presente en los endosomas Rab11+ es esencial para la activación de Rab27B y la secreción de factores quimiotácticos y angiogénicos promovidos por el CaSR
Resumen:

El receptor sensor de calcio (CaSR) es un receptor acoplado a proteínas G (GPCR). Su interacción con diferentes isoformas de la proteína G le ha permitido participar en múltiples procesos biológicos, incluidos eventos de secreción. El CaSR como todos los GPCRs sufre procesos de regulación a través del tráfico intracelular en vesículas recubiertas con Rab11. El tráfico vesicular se describe como un proceso que debe estar bien coordinado, en el cual, diferentes moléculas como las Rab GTPasas y los fosfoinosítidos le confieren características distintivas a cada una de las vesículas. El fosfatidilinositol 3-fosfato (PI3P) es el fosfoinosítido característico de los endosomas tempranos y de sorting, se genera en su mayor parte por la acción de la VPS34, una fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) de clase III, y por la participación de la PI3K-C2α, PI3K de clase II. Ésta última produce solo el 20% de PI3P en los endosomas, pero este microdominio es esencial en el reclutamiento y activación de proteínas efectoras que tengan dominios de unión a fosfoinosítidos como el dominio FYVE o PX, entre las proteínas de interacción está la Rab11. Aunque los endosomas Rab11+ están destinados a vías de reciclaje lento, nuestro grupo de estudio la ha relacionado con vías de secreción. Si bien, el PI3P promueve la activación de ciertas Rab GTPasas, aún se desconoce su vínculo con vías secretorias dirigidas por la Rab27B, una GTPasa que se ha relacionado con la secreción de factores quimiotácticos y angiogénicos promovidos por el CaSR. Este trabajo se encamina en evaluar la participación del PI3P de endosomas Rab11+ en el vínculo con las vías secretorias en las que participa la Rab27B

Examenes

Evento: Examen Predoctoral
Ponente: M. en C. Luis David Aguilar Sandoval
Día: 2022-03-22, a las 12:00:00 hrs.
Lugar: TEAMS Videoconferencia
Título: ANALISIS FUNCIONAL DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN SOX9 DURANTE LA PROLIFERACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE LAS CÉLULAS RCE1(5T5)
Resumen:

La proliferación y diferenciación del epitelio corneal son reguladas por la expresión coordinada de diferentes factores de transcripción. Entre éstos, se considera que la proteína homeótica Pax6 es uno de los principales elementos reguladores. Recientemente se describió la presencia citoplasmática y nuclear del factor Sox9 en el epitelio corneal de humano. Por otra parte, en nuestro laboratorio se reportó que Sox9 presenta un patrón de expresión bifásico en cultivos de la línea celular RCE1(5T5) de epitelio corneal de conejo. Mediante análisis bioinformáticos, determinamos las posibles rutas de señalización por las que Sox9 y Pax6 podrían regular el proceso de diferenciación corneal. El propósito de este estudio es determinar la función que Sox9 ejerce en la regulación del proceso proliferativo y en la diferenciación temprana de las células del epitelio corneal. Para ello utilizaremos como modelo a las células RCE1(5T5). Para ello analizaremos el efecto de la sobreexpresión de Sox9 en estos procesos. Asimismo, estudiaremos las consecuencias de noquear la expresión de este factor. Este análisis permitirá identificar la importancia funcional de Sox9, así como su relación con otros factores de transcripción a los que se les atribuye una función reguladora tejido específica. A largo plazo pretendemos entender los procesos que regulan el equilibrio homeostático en la superficie ocular. Esto nos permitirá, en un futuro, explorar estrategias para mejorar el proceso de reparación de la superficie ocular

Evento: Examen de Doctorado
Ponente: M. en C. Lennis Beatriz Orduña Castillo
Día: 2022-03-28, a las 10:00:00 hrs.
Lugar: TEAMS Videoconferencia
Título: Análisis de activación de Rac-GTPasa por el CaSR de tipo silvestre y receptores mutantes encontrados en pacientes con cáncer de mama
Resumen:

El Receptor sensor de calcio (Calcium sensing receptor, CaSR) es un receptor de membrana plasmática, miembro de la superfamilia de los Receptores acoplados a proteínas G (G protein coupled receptor, GPCR), señaliza principalmente a través de las proteínas Gi y Gq heterotriméricas, y representa a uno de los GPCR más mutados en cáncer, en donde las mutaciones contrasentido son las de mayor frecuencia de acuerdo con distintas bases de datos. En células de cáncer de mama se ha demostrado que CaSR promueve la migración y la secreción de péptidos quimiotácticos, contribuyendo así en los procesos tumorales. A partir de la identificación de mutaciones contrasentido del CASR en pacientes con cáncer de mama, nosotros generamos cuatro receptores CaSR (N639K, T732A, R886Q y V894I) para analizar si existen diferencias en su señalización con respecto del CaSR silvestre que contribuyan a los procesos tumorales, con énfasis en la activación de Rac-GTPasa, proteína involucrada en la migración, adhesión y secreción a través del remodelamiento del citoesqueleto de actina. En este trabajo encontramos que los receptores CaSR mutantes forman homodímeros funcionales que activan al heterotrímero Gi, que a diferencia del CaSR silvestre no requieren a Gq para promover la activación de ERK1/2 y promueven la activación diferencial de otras cinasas. Los receptores CaSR silvestre, N639K, T732A y V894I promueven la activación de Rac-GTPasa dependiente de la actividad del mTORC2; sin embargo, la respuesta ejercida por CaSR N639K es mayor con respecto al CaSR silvestre. Mientras que el CaSR R886Q es incapaz de promover la activación de Rac-GTPasa en nuestro tiempo de estudio. Nuestros resultados demuestran que la activación de Rac-GTPasa por los CaSR mutantes no promueve la migración de las células HEK293, pero podría participar en la secreción del factor quimiotáctico IL-8 promovida por el CaSR

Evento: Examen de Doctorado
Ponente: M. en C. Ana Lilia Moreno Salinas
Día: 2022-05-11, a las 11:00:00 hrs.
Lugar: Puerta Cerrada con Comité
Título: Identificación de un eje molecular de patogenicidad dado por defectos de señalización en la vía G13 como resultado de la alteración del receptor Lphn3 por variantes asociadas al Trastorno por Déficit de Atención con Hiperactividad
Resumen:

La familia de las latrofilinas (Lphn/ADGRL) forma parte de los receptores de adhesión acoplados a proteínas G (aGPCRs) que son elementos cruciales en el proceso de adhesión celular. Lphn3 ha tomado particular relevancia debido a su fuerte asociación a enfermedades psiquiátricas. Lphn3 participa regulando la formación y mantenimiento de sinapsis neuronales a través de interacciones intermoleculares con sus ligandos. Diversos polimorfismos en Lphn3 asociados a TDAH han sido reportados; sin embargo, se desconoce cómo estas alteraciones podrían afectar las funciones del receptor. En este estudio, se realizó la validación funcional de distintas variantes de Lphn3 asociadas a TDAH que afectan la estructura del receptor. Los resultados muestran una afectación en la habilidad de las variantes para estabilizar contactos de adhesión intercelular de manera específica de ligando sin afectar parámetros de interacción ligando-receptor, lo que apunto a una alteración en las propiedades intrínsecas de señalización. Mediante el uso de biosensores para evaluar señalización encontramos una afectación dada por las variantes en la vía Gα13. Adicionalmente, las funciones de remodelación de actina, así como la señalización hacia RhoA mostradas por Lphn3 en condiciones normales se vieron afectadas en presencia de variantes específicas. En resumen, los resultados obtenidos apuntan a un defecto de señalización selectivo en la vía Gα13 producto de las variantes asociadas a TDAH y destaca la interacción entre las funciones de GPCR de Lphn3 y el citoesqueleto de actina en la modulación de señales durante el neurodesarrollo relacionadas con la etiología del TDAH

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