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Seminarios

Evento: Seminario de Evaluación
Ponente: M. en C. Tania Reyes Miguel
Día: 2020-10-30, a las 12:00:00 hrs.
Lugar: TEAMS videoconferencia
Título: Cdc42 dirige actividad de RhoA en la polimerización de actina durante capacitación
Resumen:

Los espermatozoides de mamíferos adquieren su capacidad fertilizante como resultado de un proceso denominado capacitación. La polimerización de actina es importante para la capacitación; la inhibición de la polimerización de actina previene la adhesión y la fusión de el espermatozoide con el ovulo. La principal función de las proteínas Rho CDC42 y RhoA es la polimerización de actina directa, A pesar de que estas dos proteínas están presentes en los espermatozoides de los mamíferos, se conoce poco de su papel en la capacitación, reacción acrosomal y de su manera en la cual ellos polimerizan actina. El propósito de este estudio fue determinar la participación de CDC42 y RhoA en la capacitación y reacción acrosomal y su relación con la polimerización de actina usando espermatozoides de cobayo. Nuestros resultados muestran que la inhibición de CDC42 y RhoA alteran la cinética de la polimerización, capacitación y reacción acrosomal en diferentes maneras. También muestran que la iniciación de la polimerización de actina y la activación de RhoA depende en la activación de CDC42 y que RhoA inicia esta actividad y afecta en la polimerización de actina cunado CDC42 alcanza su máxima actividad. Dado que la inhibición de la cinasa de Rho (ROCK1) no puede prevenir la reacción acrosomal, la participación de RhoA en la capacitación y la reacción acrosomal es independiente de ROCK1. En general, nuestros resultados indican que CDC42 y RhoA tiene diferentes papeles en los procesos de reacción en capacitación y reacción acrosomal. CDC42 tiene un papel relevante en la regulación de estos procesos.

Examenes

Evento: Examen de Doctorado
Ponente: M. en C. Paz Durán de Haro
Día: 2020-10-27, a las 16:00:00 hrs.
Lugar: TEAMS videoconferencia
Título: Regulación en la expresión de la subunidad CaVα2δ-1 de los canales de Ca2+ por el factor de crecimiento epidérmico (EGF)
Resumen:

Los canales de Ca2+ dependientes de voltaje (CaV) se expresan en células endócrinas donde contribuyen a la secreción hormonal. Se sabe que diversos factores de crecimiento, incluido el factor de crecimiento epidérmico (EGF), afectan la expresión de los canales CaV. Estudios previos han mostrado que el EGF aumenta las corrientes de Ca2+ en la línea celular GH3, proveniente de un adenoma hipofisiario, al aumentar el número de canales CaV de alto umbral de activación (HVA) en la membrana plasmática, lo que resulta en una mayor secreción de la hormona prolactina (PRL). Sin embargo, se sabe poco sobre los mecanismos subyacentes a esta regulación. En el presente trabajo de tesis se muestra que el EGF aumenta la expresión de la subunidad auxiliar CaVα2δ-1, un componente molecular importante de los canales HVA. El análisis in silico del promotor del gen CACNA2D1 que codifica para la subunidad CaVα2δ-1 reveló la presencia de sitios de unión para factores de transcripción activados por la vía de señalización Ras/Raf/MEK/ERK. Los ensayos de inmunoprecipitación de la cromatina y de mutagénesis sitio dirigida mostraron que el factor de transcripción ELK-1 es crucial para la regulación de la expresión de CACNA2D1 en respuesta al EGF. Además, aquí se presentan evidencias de que el EGF aumenta la expresión membranal de CaVα2δ-1, y que la sobreexpresión de ELK-1 incrementa la densidad de la corriente de Ca2+ a través de los canales HVA, mientras que el silenciamiento de ELK-1 disminuye la expresión funcional de estos canales. De manera interesante, los ensayos de liberación hormonal revelaron que la sobreexpresión de CaVα2δ-1 aumenta la secreción de PRL. Estos resultados revelan un nuevo mecanismo molecular por el cual el EGF al activar la vía de señalización Ras/Raf/MEK/ERK/ELK-1 puede influir de manera determinante en la expresión de los canales de HVA y en la conducta secretora de las células adenohipofisiarias.

Evento: Examen de Doctorado
Ponente: M. en C. Alejandro Castillo Kauil
Día: 2020-10-29, a las 12:00:00 hrs.
Lugar: TEAMS videoconferencia
Título: Potencial angiogénico de RhoGEFs constitutivamente activos, diseñados a partir de la estructura del grupo que incluye a RGS-RhoGEFs e Intersectinas
Resumen:

El control espacio-temporal de las GTPasas de Rho es determinante para la remodelación del citoesqueleto de actina, los cambios en la forma de la célula, la polaridad y la migración celular. Los RhoGEFs con homología a Dbl son reguladores de la activación de las GTPasas de la familia de Rho, donde la naturaleza multidominio de la gran mayoría de los RhoGEFs permite dar cuenta de su importancia en el control de la actividad de las GTPasas, así como su contribución en eventos de carácter fisiológico y patológico. Sin embargo, falta mucho por comprender sobre los mecanismos de regulación de los RhoGEFs y su participación en la dinámica del citoesqueleto de actina. Usando versiones constitutivamente activas de un subgrupo de RhoGEFs, realizamos un tamizaje para identificar RhoGEFs-DH/PH capaces de promover cambios morfológicos afines a un fenotipo pro-angiogénico. De manera precisa reportamos que la expresión del tándem DH/PH de PRG (ARHGEF11), un GEF reportado como específico de RhoA, es capaz de generar estructuras similares a filopodios, fenotipo atribuido a la activación de Cdc42. Por medio de técnicas bioquímicas confirmamos que PRG es capaz de interaccionar y activar a Cdc42. Además, encontramos que Gas interacciona con el tándem DH/PH de PRG, aumentando su afinidad por Cdc42. Finalmente, de manera endógena y mediante el uso de herramientas quimiogenéticas, demostramos una novedosa vía Gas>PRG>Cdc42. En conclusión, mediante una estrategia de ganancia de función, conseguimos identificar características novedosas de PRG relacionadas a su activación y afinidad por las GTPasas. Nuestros resultados aportan una nueva forma de comprender el papel de los RhoGEFs en la dinámica espacio-temporal de las GTPasas de Rho.

Evento: Examen de Doctorado
Ponente: M. en C. Fernando Flores Sánchez
Día: 2020-11-17, a las 12:00:00 hrs.
Lugar: TEAMS videoconferencia
Título: Mecanismo de la secreción de mucinas en las células tipo caliciformes estimuladas por la proteasa Pic de E. coli enteroagregativa
Resumen:

Una característica distintiva de la infección por Escherichia colienteroagregativa (EAEC) es la formación de una biopelícula intestinal, que comprende una capa de moco con bacterias inmersas. EAEC y otros patotipos de E. coli secretan una proteína autotransportadora llamada Pic, la cual ha estado involucrada en dos fenotipos aparentemente contradictorios, como secretagogo de moco y como mucinasa. En este estudio, investigamos esta actividad dual de Pic, la capacidad de secretagogo de moco y la actividad mucinolítica, en células caliciformes humanas que secretan MUC2 y MUC5AC. Pic causó una hipersecreción de moco directamente por las células caliciformes, sin otras líneas celulares intestinales involucradas. Al mismo tiempo, Pic mostró una fuerte actividad proteolítica en las mucinas secretadas. Estas actividades fueron independientes ya que una mutación en el motivo serín-proteasa (PicS258I) abolió la degradación de la mucina, mientras mantenía intacta la actividad de secretagogo de mucinas. Además, las mucinas inducidas por ácido desoxicólico (DCA), un secretagogo conocido, se degradaron proteolíticamente cuando las células caliciformes se incubaron conjuntamente con Pic (DCA/Pic), mientras que la co-incubación DCA/PicS258I (una mutante en el sitio activo) causó un efecto sinérgico sobre la hipersecreción de moco. Pic fue más eficiente degradando MUC5AC que MUC2 pero no se detectó degradación con Pic inactivado en el sitio activo por mutación o inhibición farmacológica. Sorprendentemente, Pic cortó a la MUC5AC en el dominio C-terminal, dejando subproductos N-terminales, lo cual afecta la característica de las mucinas formadoras de gel. Interesantemente, Pic estimuló la rápida secreción de mucina en las células tipo caliciformes al activar la vía de calcio intracelular como resultado de la activación de la señal de transducción de PLC, lo cual conduce a la producción de DAG y liberación de IP3, un segundo mensajero de señalización de calcio. Así, la actividad dual de Pic, como secretagogo de moco y mucinasa, es relevante en el contexto de la generación de fuentes de carbono y la penetración de la capa de moco, lo que permite que EAEC tenga acceso a las células epiteliales.

Evento: Examen de Doctorado
Ponente: M. en C. Javier Ramírez Ricardo
Día: 2020-12-10, a las 13:00:00 hrs.
Lugar: TEAMS videoconferencia
Título: Participación de Src y FAK en la migración e invasión celular inducida por vesículas extracelulares derivadas de células cancerosas mamarias
Resumen:

El cáncer de mama es el tumor maligno más frecuente y principal causa de muerte de mujeres en México y en todo el mundo. Numerosos estudios reportaron que una dieta rica en ácidos grasos incrementa el riesgo de desarrollar cáncer de mama. Entre ellos, destaca el ácido linoleico (AL), el más abundante en la dieta occidental. Estudios previos demostraron que el AL induce proliferación, migración e invasión en células de cáncer de mama e induce un proceso tipo transición epitelio-mesénquima en células epiteliales mamarias MCF10A. Por otra parte, la comunicación celular es un mecanismo importante durante el inicio, la progresión y la metástasis tumoral. En particular, la comunicación mediada por pequeños fragmentos esféricos de membrana, denominados vesículas extracelulares (VEs) que participan en tales procesos. Sin embargo, cómo las VEs promueven la migración e invasión en cáncer de mama, no ha sido totalmente dilucidado. El objetivo de este trabajo fue estudiar el papel de las VEs secretadas por células MDA-MB-231 tratadas con AL y VEs de pacientes con cáncer de mama en los procesos de migración e invasión. Los resultados de este trabajo muestran que las VEs derivadas de células MDA-MB-231 tratadas con AL (VEs AL) y las VEs derivadas de pacientes con cáncer de mama (VEs CM) promueven la secreción de las metaloproteinasas 2 y 9, e incrementan la migración e invasión de las células MDA-MB-231. Además, las VEs AL y VEs CM inducen la activación de las cinasas Src y FAK, y promueven el ensamble de adhesiones focales. Adicionalmente, las VEs AL promueven la activación de Akt-2. En resumen, las VEs AL y VEs CM incrementan la migración e invasión de células MDA-MB-231 a través de una vía dependiente del complejo cinasa dual Src/FAK.

Evento: Examen de Maestría
Ponente: M. C. y P. Cesar Romel Barrientos Maldonado
Día: 2020-12-16, a las 13:00:00 hrs.
Lugar: TEAMS videoconferencia
Título: Caracterización del desensamble de las uniones estrechas por la Proteína Secretada F (EspF) de Escherichia coli Enteropatógena en células epiteliales intestinales
Resumen:

Escherichiacoli Enteropatógena (EPEC) es una de las principales causas de infecciones diarreicas. EPEC coloniza el intestino, formando estructuras llamadas pedestales que son ricos en actina. La patogénesis de EPEC está relacionada con su isla genómica de patogenicidad LEE. Esta isla codifica para el sistema de secreción tipo 3, el cual inyecta diversas proteínas efectoras a las células intestinales. Uno de estos efectores, EspF, es capaz de alterar las proteínas que forman las uniones estrechas (TJ) de las células epiteliales, favoreciendo la producción de diarrea. Además, se sabe que la infección por EPEC produce la endocitosis de claudina-1 y ocludina. A su vez, EPEC se ha visto relacionado con la alteración de proteínas de la endocitosis mediada por clatrina, como SNX9, dinamina y clatrina. En este trabajo nos enfocamos en investigar la vía endocítica que siguen las proteínas de las TJ durante la infección por la cepa de EPEC 2348/69 en la línea intestinal CaCo-2-BBe1. Utilizando microscopía confocal observamos que ZO-1 co-localiza con clatrina, a pesar de no ser una proteína transmembranal; indicando que está asociada por la cara citosólica de las vesículas, probablemente interaccionado con proteínas transmembranales de la vesícula. En cambio, clatrina solo co-localizó con ocludina en la membrana pero no en las vesículas cubiertas de clatrina. Estos resultados indican que la ocludina se endocita por una vía independiente de clatrina. Otras proteínas de la TJ, posiblemente claudina-1, se endocitan mediante vesículas recubiertas de clatrina. De manera interesante, cuando se usó un inhibidor de la endocitosis mediada por clatrina (Pit-Stop 2), ZO-1 y ocludina siguieron siendo desensambladas, lo que fundamenta que existen vías independientes de clatrina involucradas en las alteraciones de las TJ inducidas por EPEC; sin embargo, se requerirán investigaciones posteriores para identificar las vías endocíticas completas de dichas proteínas.

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